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BCL-2/ Bax的比值決定著細胞凋亡
所屬分類:醫學論文  日期:2018-08-29  瀏覽:

 


李紅宇1 陳如平1 吳建民2 陳哲2

1 浙江中醫藥大學    2 浙江省新華醫院)

【摘要】細胞凋亡的研究是目前生命科學界最為熱門話題之一,也是生命科學界乃至社會各界爭相投入的研究領域。在哺乳動物中bcl- 2基因及其相關蛋白在細胞凋亡調控過程中起重要作用:離子通道蛋白和吸附/錨定蛋白 Bcl-2蛋白可能具有雙重功能;抑制鈣離子跨膜流動;Bcl-2的過度表達可減少氧自由基產生和脂質過氧化物的形成。Bax基因是Bcl-2家族中的促凋亡成員,是成員之間二聚體化是功能調節的重要形式。BaxBcl-2形成異源二聚體,抑制Bcl-2,發揮促細胞凋亡作用舊1,Bax本身具有促細胞凋亡作用。當Bax二聚體占優勢時,細胞凋亡被誘導;當Bcl-2二聚體占優勢時,細胞凋亡被抑制。Bcl-2/Bax比值決定著細胞凋亡的走向,Bcl-2/Bax比值上調,抑制細胞凋亡;Bcl-2/Bax比值下調,促進細胞凋亡。

【關鍵詞】Bcl-2  Bax  細胞凋亡  

【Abstract】Apoptosis in the life science community is one of the most popular topic is the life science community as well as competing research investment. In mammals, the bcl-2 gene and its associated proteins in apoptosis regulation plays an important role in the process: ion channel protein and the adsorption / anchoring protein Bcl-2 protein may have dual function; inhibition of transmembrane calcium flow; Bcl- 2 overexpression can reduce the production of oxygen free radicals and lipid peroxide formation. Bax gene is a Bcl-2 family pro-apoptotic members, is among members of the dimerization is an important form of functional regulation. Bax and Bcl-2 heterodimer, inhibiting Bcl-2, play a role in promoting apoptosis in the old 1, Bax itself has a proapoptotic effect. When Bax dimer dominant, the cells were induced apoptosis; when the Bcl-2 dimers dominant when apoptosis is inhibited. Bcl-2/Bax ratio determines the direction of apoptosis, Bcl-2/Bax ratio increased, inhibition of apoptosis; Bcl-2/Bax ratio reduction, and promote apoptosis.

【Keywords】BCL-2   Bax  Apoptosis

細胞凋亡[1-3]apoptosis)一詞源于古希臘語,意為“凋落”,Kerr等于1972年首先提出,又稱程序性細胞死亡(programmed cell death,PCD),指有核細胞在一定條件下通過啟動內部機制,經過一連串的細胞變性,最終發生死亡的過程。人們對細胞凋亡現象進行了廣泛、深入的研究。但是,凋亡的分子和生化機制迄今尚未徹底明了;而已形成的初步認識大多源于對Bcl-2基因家族的研究。已知,調亡進程可分為三個時相:誘導期,效應期和降解期[4]。在誘導期,細胞接受各種信號從而引發各種不同的效應:進入效應期后,經過一些決定細胞命運(存活/死亡)的分子調控點,細胞進入不可逆的程序化死亡,這些調控分子包括一系列原癌基因和抑制癌基因的產生,其中Bcl-2家族起著決定性的作用;降解期則產生可見的凋亡現象。

 1Bcl-2與Bax基因的發現及其特性:

Vaux[5]首先報道 bcl-2 可以阻止細胞凋亡并使細胞壽命延長,細胞凋亡抑制基因 bcl-2, 其名稱來源于B細胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/Leu kemia-2,bcl-2),因它首先發現在B細胞相關的惡性腫瘤中,位于第14和第18染色體的轉位點處[t14;18)(q32;q21]。在非何杰金氏病B細胞淋巴瘤的絕大部分濾泡中存在這種染色體轉位點。 bcl-2 是目前發現的與凋亡關系密切的原癌基因之一,能夠編碼 bcl-2α(26-kD)和 bcl-2β(22-KD)兩種蛋白質,前者能在組織細胞中檢測出來。組成 bcl-2 的膜蛋白主要存在于線粒體外膜、核膜及部分內質網中,它很少與其他生化機制已清楚的蛋白同源。免疫組化表明p26- bcl-2-α膜蛋白在正常組織自身穩定方面起重要作用。最近發現 bcl-2是許多生理或病理凋亡的關鍵性調節因子,在細胞凋亡的公共途徑上起決定性作用[6]。John[7]通過培養神經元有絲分裂狀況也證實 bcl-2 在不引起細胞增殖的情況下,可以抑制細胞凋亡。 bcl-2過度表達不影響細胞增殖而盡量減少細胞死亡,可引起增殖性病變或腫瘤發生。

  1993Oltvai首先發現Bax基因[8],它是一種與bcl-2同源的相關蛋白,能對抗后者的生物學活性。Bax基因是bcl-2基因家族的一員,定位于人類第19號染色體q13.3q13.44.5kb,含6個外顯子,在老鼠中Bax基因能編碼三種不同蛋白質,最常見是的編碼21-KDBax-α蛋白,另可以編碼一個24-KDBax-β蛋白和一個5-KDBax-γ蛋白,人p21-Bax編碼蛋白質的氨基酸順序與人bcl-2約有21%的同源性。Bax-α蛋白的結構類似于bcl-2,它有許多疏水性氨基酸伸展至羧基末端附近,具有跨膜區結構。而Bax-β和Bax-γ則沒有跨膜區。Bax的主要作用是加速細胞凋亡,并與bcl-2一起調節細胞凋亡。

2Bcl-2與Bax在細胞凋亡作用:

目前已知有多種相關因子參與細胞凋亡調控[5-13],其中Bcl-2家族的成員發揮重要作用,Bcl-2是一種原癌基因,其編碼一個26000的蛋白,定位于細胞內質網膜、線粒體膜和核膜上,是一種膜定位蛋白,促進細胞由G1期向S期轉化并修復染色體損傷,或在細胞分化早期通過對抗前凋亡分子Bax延長細胞的生存期,使細胞永生化,與腫瘤的早期形成有關,Bcl-2家族成員在細胞凋亡調控中占據特殊的地位在多種腫瘤中都具有重要的作用。 Bc l-2 是 細胞凋亡的主要調節因子。Bcl-2基因定位于染色體18g21,由兩個外顯子組成?;虼虬醒芯孔C明,Bcl-2有抑制細胞凋亡的作用。Bcl-2的作用機制包括降低細胞膜通透性,減少細胞色素C釋放;抑制內質網上鈣離子跨膜流動。

Bcl-2抑制細胞凋亡可能與其以下幾種作用有關:

  1 離子通道蛋白和吸附/錨定蛋白 Bcl-2蛋白可能具有雙重功能[9]:離子通道蛋白和吸附/錨定蛋白,提出Bcl-2抑制凋亡的部分新機制。離子通道蛋白 體外實驗證實,Bcl-2、Bcl-X1Bax能在線粒體上形成離子通道,提示它們可能參與調節一些與凋亡有關的細胞現象,過度表達的Bcl-2能抑制線粒體通透性改變,并影響巨孔的形成,從而抑制凋亡。Yang等與Kluck[10]發現Bcl-2可以通過抑制線粒體釋放Cyt c來抑制凋亡,繼而Rosse等和Zhivotovsky等用兩種不同的方法證明了即使Cyt c已經釋放入胞漿,Bcl-2仍能延遲細胞死亡,這是由于Bcl-2抑制了活化的Caspases對線粒體釋放的上游和下游都有Bcl-2調節凋亡的作用點。AIF作為一種線粒體來源的效應蛋白酶,在分離在胞核中能誘導凋亡,同時還能激發線粒體通透性改變,誘導線粒體釋放Cyt cCaspase-9,并在體外切割和激活其底物——半胱氨酸蛋白酶CPP32。體外研究發現,Bcl-2過度表達可能阻止AIF從分離的線粒體上釋放,但它并能影響AIF的產生,同時也不能影響AIF促凋亡的功能。有學者研究發現[11]吸附/錨定蛋白在正常情況下Bcl-2通過其C端疏水殘基的伸展而錨定在細胞內膜上,作為吸附/錨定蛋白,可把胞液蛋白固定在膜邊,或是引導胞液蛋白與別的膜蛋白相互作用。

2抑制鈣離子跨膜流動 Lam[12]曾報道鈣泵特異性抑制劑ThapsigargenTG)誘導的WEH17.2等細胞的凋亡可被Bcl-2所抑制,其原因是Bcl-2抑制了Ca2+的跨膜流動,提示Bcl-2可通過調節胞內鈣離子濃度來調節凋亡。然而Wei等在神經元細胞GT1-7中發現Bcl-2中發現Bcl-2可抑制由TG所誘導的凋亡,但并不能抑制TG誘導的胞內鈣離子濃度升高;同時Jason等在中國倉鼠卵巢細胞5AHSmyc中去除細胞內貯存Ca2+后發現過度表達的Bcl-2仍可抑制凋亡,提示Bcl-2對胞內Ca2+濃度的調節作用也只能是其抑制凋亡的機制之一。

3)眾學者[13-14]以往研究表明細胞催抗氧化作用,在去除生長因子所誘發的凋亡中,活性氧損傷(ROS)是促發細胞死亡的主要誘因:Bcl-2的過度表達可減少氧自由基產生和脂質過氧化物的形成。提示Bcl-2的抗氧化作用是間接的,即可能在于抑制超氧陰離子的產生而不是直接清除活性氧。細胞色素ccytochrome c, Cyt c)作為呼吸鏈中重要的電子傳遞體,它從線粒體內膜上的釋放會阻斷電子向下游傳遞體,它從線粒體內膜上的釋放會阻斷電子向下游的傳遞,危及呼吸鏈的功能并導致超氧陰離子的加速產生;而Bcl-2可以抑制Cyt c的釋放,從而抑制了超氧陰離子的產生。此外,Bcl-2還可以增加胞內的谷胱甘肽(GSH)等抗氧化劑,升高NAD+/NADH的比值,抑制和凋亡相聯系的GSH降低,促進GSH進入核內,從而影響細胞的氧化還原狀態。但也有證據表明,在沒有自由基的情況下Bcl-2也能抑制凋亡。因此,Bcl-2的性質遠非僅僅是一種抗氧化劑。

3Bcl-2/Bax在細胞凋亡過程的表達:

Oltvai[15]研究報道bcl-2家族的成員通常以二聚體的形式發揮作用,Bcl-2 基因家族包括促進( Bax ) 和抑制( Bcl-2) 細胞凋亡的兩大類成員, 是脊髓損傷后細胞凋亡的重要調控基因。Boise 等[16]認為:Bcl-2 與Bax 在體內以二聚體形式發揮作用, 二者的比例決定細胞生存或凋亡。Bcl-2 是一個多基因家族, 它們有一個共同的特征是每個分子上都含有BH1 和BH2 這兩個同源結構, 但它們的比例決定了細胞是否走向凋亡。Bax為Bcl-2 家族中的一員,與Bcl-2 不同的是:Bax 是細胞凋亡的必不可少的物質,為細胞凋亡促進因子 ,其促進凋亡的作用可能是通過誘導Caspase 的釋放來實現的。研究發現:Bcl-2 和Bax 之間通過BH1 和BH2 可形成同源二聚體。Bcl-2 中的BH1 或BH2 區域特定的氨基酸被置換后, Bcl-2 抑制凋亡的功能喪失, 而這種突變后的Bcl-2 自身還能形成同源二聚體,卻無法形成異源二聚體。這表明Bcl-2 抑制凋亡必須通過與Bax 形成異源二聚體來實現。當Bax 同源二聚體形成時, 則可以誘導凋亡, 當Bax 在細胞中過度表達, Bax/ Bax 二聚體的比例> Bcl-2/ Bax 二聚體的比例時, 促進細胞的死亡。當Bcl-2 過量表達, Bcl -2/Bax 二聚體> Bax/Bax 的比例時, 凋亡被抑制。Bcl-2 / Bcl- 2, Bcl-2/BaxBcl-2/Bcl-xL均抑制細胞凋亡,而Bax/Bax,Bax/BadBcl-2/Bax-xs均促進細胞凋亡。由此可見, 這種復雜的聚合反應使分子間可相互調節其活性, 從而產生細胞存亡的不同結果。

Krajewski[17]首次應用免疫組化研究表明:Bax在組織器官中的表達要比Bcl-2更加廣泛,可出現在胃腸、肺、胃、胸膜、淋巴結、骨髓、肝脾、胰腺、心腦及子宮內膜和睪丸等處,而Bcl-2則在肝、腎、胰腺等處很少或沒有表達。表明Bax除了作為Bcl-2的顯性抑制劑,形成Bcl-2/Bax異型二聚體以終止發生細胞凋亡外,是否尚有其他的功能存在,有待于進一步研究,同時報道,Bcl-2Bax表達并非完全一致,其中一種陽性表達,另一種陰性表達,推測尚存在bcl-2家族的其他已知或未知蛋白,只是未檢測到而已。

Yang[18-20]報道Bcl-2抗凋亡蛋白的作用實際上取決于它的許多潛在的對抗性蛋白的相互作用,Baxbcl-2的抑制劑,而Bcl-2作為Bax的調節劑,二者對細胞凋亡形成互補調節或相反調節,在控制細胞生存和死亡中起重要作用。而促凋亡分子和BaxBcl-2則競爭結合細胞死亡抑制分子如Bcl-X1Bcl-2,由此替換了Bax并促進Bax同二聚體形成,誘導凋亡。另外,Bcl-2還可與Bcl-2家族外的11種蛋白質結合,包括蛋白激酶Raf-1、蛋白磷酸酶Calcineurin、GTP酶、R-RasH-Ras、p53-BP2、朊蛋白Pr-1、Ced-4、BAG-1、Nip-1、Nip-2Nip-3,并由此實現其抗凋亡作用。

4結語

在調節凋亡相關基因中Bcl-2家族是最重要的調節因子之一[21-23]。在中樞神經系統發育中Bcl-2基因表達產物起著重要作用,Bcl-2能抑制線粒體通透性改變,并影響巨孔的形成、抑制了Ca2+的跨膜流動、減少氧自由基產生和脂質過氧化物的形成,從而起到了抗細胞凋亡的作用。目前Bcl-2/Bax是凋亡分子機制研究的主要靶分子。Bcl-2可與促凋亡Bax形成二聚體,如果Bax相對量高于Bcl-2,則Bax同二聚體的數量增多,從而促進細胞死亡;而如果Bcl-2相對量高于Bax,則促進形成Bcl-2/Bax異二聚體,并使Bcl-2同二聚體的量增多,從而抑制細胞死亡。Bcl-2/Bax比值決定著細胞凋亡的走向,Bcl-2/Bax比值上調,抑制細胞凋亡;Bcl-2/Bax比值下調,促進細胞凋亡。隨著對Bcl-2以及凋亡本身研究的日漸深入,Bcl-2是作用機制和凋亡的分子機制最終被闡明,從而提高對與凋亡有關的疾病的認識和診治水平。

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